Tehnica recoltarii probelor pentru determinari hematologice

TEHNICA RECOLTARII PROBELOR PENTRU

DETERMINARI HEMATOLOGICE

TERMENI FOLOSITI SI DEFINIREA ACESTORA

Definitii

Eritrocitul :celula discoidala si biconcava, de culoare roz intens (acidofil) in coloratia panoptica, centrul celulei fiind mai putin colorat, cu diam. intre 7 si 8 µ.

Reticulocitul : dupa pierderea nucleului eritroblastul acidofil devine reticulocit, un eritrocit tanar care isi pastreaza insa mitocondriile si substanta bazofila.

Leucocitul : in mod normal in singele periferic se intilnesc granulocitele segmentate si un numar mic de granulocite nesegmentate. Granulocitul nesegmentat are nucleul in forma de potcoava cu cromatina foarte densa , formata din mase compacte foarte inchise la culoare, despartite prin benzi inguste si clare de oxicromatina, aspect care a fost denumit tigrat. Citoplasma este acidofila si contine granulatii diferentiate , fie neutrofile, fie eozinofil, fie bazofile. Granulocitul segmentat denumit impropriu polinuclear are nuceul polisegmentat, cu dimensiuni intre 12-15µ. Granulocitul segmentat neutrofil are citoplasma acidofila, roz palid, cu granulatii neutrofile, nucleul cu doua sau mai multe segmente. Granulocitul segmentat eozinofil are citoplasma plina de granulatii caracteritice portocalii, nucleul are numai doua segmente(nucleu in bisac) si mult mai rar trei segmente. Granulocitul segmentat bazofil are granulatii caracteristice care acopera aproape toata citoplasma , nucleul segmentat, deseori neregulat si frecvent in forma de trifoi, in general bazofilele sunt mai mici decit neutrofilele si eozinofilele.

Trombocitul : rotunde sau ovale trombocitele au dimensiuni care variaza intre

2-5 µ. In structura lor se disting 2 parti :

partea periferica , omogena, aproape incolora sau foarte slab bazofila, denumita hialomer

partea centrala , denumita cromomer, contine granulatii dens dispuse de culoare rosie-violacee.

VSH : viteza cu care sedimenteaza hematiile dupa ce singele a fost tratat cu anticoagulat si lasat in repaus.

Timpul de protrombina : (P.T.,  testul Quick), este folosit ca test de screening pentru calea extrinseca a coagularii. Exploreaza factorii coagularii din calea extrinseca ( VII, X, V, II ), care constituie complexul protrombinic.

Principiul testului este recalcifierea plasmei citratate in prezenta unui exces de tromboplastina tisulara ( F III). Coagularea indusa merge pe calea extrinseca, scurtcircuitand factorii din sistemul intrinsec , care activeaza F X.

PT este indicat in mod special in monitorizarea terapiei anticoagulante orale datorita sensibilitatii la factorii dependenti de vit.K : II, VII si X.

PT este utilizat in dg: ( este alungit):

deficitului congenital sau dobandit al factorilor: II, V, VII, X

tratament cu antagonosti ai vit. K

diateze hemoragice la nou-nascut

verificarea capacitatii de sinteza a ficatului ( insuficienta hepatica: ciroza, hepatita,icter)

hiperfibrinoliza, CID

Timpul partial de tromboplastina  activat APTT este timpul de recalcifiere al plasmei sarace in trombocite, in prezenta unei cantitati standard de substitut plachetar ( cefalina, care inlocuieste fosfolipide trombocitare) si a unui activator specific, caolinul.

APTT exporeaza calea intrinseca a coagularii ( este un test de coagulabilitate globala intrinseca):implica factorii plasmatici XII, XI, IX, VIII, X,V, II, I. Nu implica, deci nu e sensibil la variatiile cantitative sau calitative ale trombocitelor, factorilor VII si XIII

APTT permite un screening rapid al tulburarilor caii extrinsece a coagularii si este foarte sensibil la factorii VIII, IX si factorii de contact.

Este utilizat in :  - diagnosticarea hemofiliilor

- monitorizarea terapiei cu heparina

Folosirea APTT ca test de screening al tulburarilor de coagulare este indicata in special inaintea interventiilor chirurgicale, permitand diagnosticarea unei eventuale hemofilii.

TIMPUL HOWELL (T.H.) masoara timpul de coagulare al unei plasme citratate bogata in trombocite, dupa adaugarea de CaCl₂ . Este un test de coagulabilitate globala a caii intrinsece, care implica toti factorii plasmatici, cu exceptia F VII, si factorii plachetari si estimeaza si functia plasmatica si functia plachetara.

Fibrinogenul : fractiune omogena, cu rol fundamental in coagulare, este o glicoproteina cu greutate moleculara mare (340.000).

Simboluri si prescurtari

RBC ( numarul eritrocitelor)

WBC ( numarul leucocitelor)

PLT ( numarul trombocitelor)

MPV ( volumul trombocitar mediu )

MCV ( volumul eritrocitar mediu)

HGB (concentratia de hemoglobina)

HCT ( hematocritul)

MCH ( hemoglobina eritrocitara medie)

MCHC ( concentratia de hemoglobina eritrocitara medie)

RDW ( latimea distributiei eritrocitelor)

LYMF ( limfocitele in numar absolut si in procente)

GRAN ( granulocitele in numer absolut si in procente)

PDW ( latimea de distributie a trombocitelor -in valoare absoluta)

PCT (trombocitocrit)

VSH (viteza de sedimentare a hematiilor)

ECHIPAMENTE DE INCERCARE SI MASURARE

PRELEVARE PRODUSELOR BIOLOGICE

Prelevarea sangelui pentru determinarile hematologice se face dimineata pe nemancate. Se folosesc vacutainere sau seringi de unica folosinta. Se preleveaza un volum de sange variabil in functie de tipul de analiza, de preferinta din vena de la plica cotului, in felul urmator : pacientul asezat de preferinta pe un scaun de recolta cu o musama sub cot pentru a preveni patarea lenjeriei cu solutii decontaminante sau sange, se fixeaza garoul la 10 cm proximal de zona punctiei, se strange si se relaxeaza de cateva ori pumnul fara a masa bratul. Se descopera vena de la plica cotului, se antiseptizeaza regiunea cu alcool sanitar si se face punctia fie aplicand un vacutainer fie cu o seringa. Dupa recoltare zona punctionata se acopera cu un plasture.

Prelevarea singelui pentru hemoleucograma se face in vacuette de 1 ml cu dop mov ce contin EDTA K₃ in cantitate de 1 ml .

Prelevarea singelui pentru VSH se face in vacuette de 2 ml cu dop negru ce contin citrat trisodic 3,2%,.

Pentru testele de coagulare (timpul de protrombina, si timpul partial de protrombina, fibrinogen) se recolteaza in vacuette de 2 ml cu dop bleu ce contine citrat de sodiu 3,2%.

Transportul produsului patologic : odata recoltat sangele se trimite in cel mai scurt timp la laborator.

Toate esantioanele (probele) pot fi potential contaminate, de aceea ele trebuie transportate ambalate cu respectarea regulilor de transport a agentilor infectiosi ( pungi de plastic in cutii bine asigurate - casolete). Esantioanele vor fi etichetate si insotite de buletinul cu datele de identificare.

Pregatirea laboratorului pentru primirea probelor :

pregatirea vacutainerelor sau flacoanelor in care se va face recolta de sange ;

pregatirea solutiei dezinfectante utilizata pentru toate manoperele din timpul lucrului ;

scoaterea reactivilor din frigider si aducerea acestora la temperatura camerei ;

pregatirea reactivilor conform instructiunilor din trusa. ;

pregatirea pipetelor semiautomate si a suportului cu conuri de prelevare ;

verificarea aparatelor

dezinfectia mesei de lucru.

ACTIUNI SI/SAU MASURI PREVENTIVE

Protectia personalului : toate masurile trebuie sa reflecte practica corecta in laborator. Masurile constau in :

Ordine si curatenie perfecta ;

Purtarea pe tot timpul activitatii a halatului de protectie curat, corect incheiat si legat.

Echipamentul de protectie se pastreaza separat de hainele si lenjeria pentru exterior.

Se lasa la locul de lucru echipamentul de protectie ori de cate ori se deplaseaza in alte zone de activitate (in afara laboratorului).

Se spala mainile dupa orice manipulare de material infectios si inainte de a parasi aria de lucru.

Se protejeaza sub pansament hidrofug orice solutie de continuitate de pe tegumentul expus (zgarieturi, taieturi).

Se eticheteaza cu insemnul riscului biologic probele care vin de pacientii cu hepatita sau SIDA.

Nu se pipeteaza cu gura.

La locul de lucru nu se introduc in gura pixuri, creioane, degete, alimente, bauturi, tigari.

Nu se utilizeaza sticlarie ciobita sau fisurata.

Manipuleaza cu grija substantele chimice.

Dezinfecteaza suprafetele de lucru la terminarea activitatii si dupa orice varsare de produs infectios sau ori de cate ori suspectezi o contaminare accidentala.

Protectia mijloacelor de incercare si masurare :

Frigiderele si congelatoarele se curata si decongeleaza la doua luni si dupa fiecare intrerupere de curent. Se urmareste temperatura zilnic cu limite ale tolerantei de 2-8 C. Verificare tehnica periodica.

Centrifuga : se curata peretii interiori cu dezinfectanta necoroziv (glutaraldehida), saptamanal sau dupa spargerea sau varsarea unui tub. Revizie tehnica anuala.

Verificare volumetrica a pipetelor semiautomate prin compararea volumului de apa distilata la +4 C cu masa acestuia.